Mitokondriyal DNA, kısaca mt-DNA hücrelerimizin çekirdeği haricinde bulunan enerji üretimi sağlayan halkasal yapılı DNA molekülüne denir. Mt-DNA maternaldir, yani sadece anneden aktarılır. Bu nedenle mt-DNA testi, dişilerden çocuklara geçen mitokondriyal DNA dizisi varyasyonuna ve profillendirilmesine dayanır. Bu testle, iki veya daha fazla kişinin (erkek veya kadın) anne soyları aracılığıyla ilişkili olup olmadığını belirleyebiliriz. Test, aynı biyolojik anneyi paylaşıp paylaşmadıklarını doğrulamak isteyen kardeşler arasında da kullanılabilir.

Mt-DNA testi, test yaptıran kişiler  (örneğin hala ve yeğen veya büyükanne ve torun) arasındaki akrabalığın bağını söyleyemez; bu test size yalnızca ortak bir annelik soyunu paylaşıp paylaşmadığınızı söyleyecektir